|
|
Identifikace baktérií mléčného kvašení v probiotických preparátech (tabletách) s využitím amplifikačních metod
Balogová, Petra ; Trachtová, Štěpánka (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Laktobacily hrají důležitou roli ve fermentačních procesech již po tisíciletí. Byly prostudovány jejich probiotické vlastnosti a dnes jsou používány při výrobě fermentovaných potravinových výrobků a doplňků stravy včetně farmakologických preparátů. V této práci byla pozornost zaměřena na zástupce rodu Lactobacillus v probiotických preparátech (tabletách). Pro identifikaci laktobacilů v sedmi probiotických preparátech byla použita metoda polymerázové řetězové reakce (PCR), založené na amplifikaci sekvence DNA. Jako DNA matrice byla do PCR směsí použita celková DNA izolovaná z tablet pomocí magnetických nosičů (P(HEMA-co¬-GMA) pokrytých karboxylovými skupinami. Rodově specifické produkty (250 bp) byly detekovány pomocí gelové elektroforézy na agaróse. Přítomnost DNA rodu Lactobacillus byla prokázána ve všech výrobcích kromě jednoho. Na etiketě tohoto výrobku byla uvedena pouze přítomnost probiotických bakterií. Pravděpodobně se jednalo o zástupce jiného rodu než Lactobacillus.
|
|
|
Izolace a identifikace DNA probiotických bakterií v komplexních matricích
Balogová, Petra ; Horák, Daniel (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
V dnešní době jsou hojně využívány v potravinářském průmyslu probiotické bakterie mléčného kvašení (BMK) a bifidobakterie. Tvoří mikroflóru gastrointestinálního traktu. Mohou být do organismu dodávané jako potravinové doplňky. Nejnovější metody identifikace bakterií mléčného kvašení a bifidobakterií jsou založeny na analýze DNA s využitím amplifikačních metod. Nejvíce se využívá polymerázová řetězová reakce (PCR). Cílem diplomové práce bylo využití rodově a druhově specifických PCR pro identifikaci kmenů rodu Lactobacillus a Bifidobacterium v komplexních matricích (6 potravinových doplňků: Zenflo, Linex Forte, Probian, Nutra Bona, GS Laktobacily Forte, Pangamin Bifi Plus). Do PCR směsi byla použita celková DNA izolovaná z tablet pomocí magnetických nosičů pokrytých karboxylovými skupinami. DNA byla izolována z hrubých lyzátů buněk. Při přípravě hrubých lyzátů bylo testováno množství lysozymu (3 mg/ml, 10 mg/ml) v lyzačním roztoku, délka inkubace s lysozymem při laboratorní teplotě (1,5 hod, 3 hod) a s proteinázou K a SDS při 55 °C (1 hod, 3 hod, přes celou noc). Izolovaná DNA byla detekována pomocí agarósové gelové elektroforézy a spektrofotometricky. Přítomnost bakteriální DNA byla ověřena v PCR .K identifikaci byly použity specifické primery pro rod Lactobacillus, Bifidobacterium a druhy Lb. acidophilus, Lb. casei/paracasei, Lb.rRhamnosus, Lb. Plantarum, B. animalis, B. bifidum, B. infantis, B. longum. U třech probiotických preparátů (Zenflo, Linex Forte a Pangamin Bifi Plus) byla prokázána shoda PCR produktů s deklarovanými údaji. U ostatních probiotických tablet (Probian, Nutra Bona, GS Laktobacily Forte) byla shoda jen na úrovni rodů.
|
|
|
Testování autenticity potravin s využitím DNA analýzy
Kocianová, Vanda ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Ověření autenticity potravinářských výrobků je důležitým krokem před jejich uvedením na trh. Tohle testování zabezpečuje, že výrobek skutečně obsahuje to, co uvádí etiketa a taktéž je ověřena jeho zdravotní nezávadnost. Jednou z metod, které je možné použít na ověření autenticity je polymerázová řetězová reakce (PCR). Experimentální část práce byla zaměřena na izolaci DNA pomocí magnetických částic v kvalitě pro PCR z potravinářského výrobku – kečupu. Jako kontrola byla izolována ze semen a stonku rajčete. Byla porovnávána amplifikovatelnost DNA izolované z výrobku pomocí magnetických částic separovaných jehlou a separátorem. Metodu je potřeba dále optimalizovat.
|
|
|
Optimalizace izolace DNA z rostlin máku a makových výrobků.
ZAHRADNÍK, Václav
Bakalářská práce se zabývá zhodnocením vybraných izolačních metod DNA na vybraných vzorcích máku, za účelem zhodnocení kvality a kvantity vyizolované DNA a vybrání metod, které by mohli být v budoucnu plošně použity při testování padělání máku v potravinách. V Literární rešerši jsou zmíněné metody izolace a způsoby hodnocení. Metodika je dále zaměřena na izolaci za použití jak firemně dostupných kitů, tak klasických metod (CTAB-PVP), zhodnocení získaných vzorků pomocí spektrofotometrického měření a PCR reakce s následnou elektroforézou na gelu. Z výsledků je zřejmé, že jako nejlepší metody se jeví klasické metody CTAB modifikované pro rostliny. Já ovšem tyto metody nedoporučuji kvůli náročnosti při práci a přikláním se k firemně dodávaným kitům, které jsem testoval.
|
|
|
Testování autenticity potravin s využitím DNA analýzy
Kocianová, Vanda ; Rittich, Bohuslav (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Ověření autenticity potravinářských výrobků je důležitým krokem před jejich uvedením na trh. Tohle testování zabezpečuje, že výrobek skutečně obsahuje to, co uvádí etiketa a taktéž je ověřena jeho zdravotní nezávadnost. Jednou z metod, které je možné použít na ověření autenticity je polymerázová řetězová reakce (PCR). Experimentální část práce byla zaměřena na izolaci DNA pomocí magnetických částic v kvalitě pro PCR z potravinářského výrobku – kečupu. Jako kontrola byla izolována ze semen a stonku rajčete. Byla porovnávána amplifikovatelnost DNA izolované z výrobku pomocí magnetických částic separovaných jehlou a separátorem. Metodu je potřeba dále optimalizovat.
|
|
|
Izolace a identifikace DNA probiotických bakterií v komplexních matricích
Balogová, Petra ; Horák, Daniel (oponent) ; Rittich, Bohuslav (vedoucí práce)
V dnešní době jsou hojně využívány v potravinářském průmyslu probiotické bakterie mléčného kvašení (BMK) a bifidobakterie. Tvoří mikroflóru gastrointestinálního traktu. Mohou být do organismu dodávané jako potravinové doplňky. Nejnovější metody identifikace bakterií mléčného kvašení a bifidobakterií jsou založeny na analýze DNA s využitím amplifikačních metod. Nejvíce se využívá polymerázová řetězová reakce (PCR). Cílem diplomové práce bylo využití rodově a druhově specifických PCR pro identifikaci kmenů rodu Lactobacillus a Bifidobacterium v komplexních matricích (6 potravinových doplňků: Zenflo, Linex Forte, Probian, Nutra Bona, GS Laktobacily Forte, Pangamin Bifi Plus). Do PCR směsi byla použita celková DNA izolovaná z tablet pomocí magnetických nosičů pokrytých karboxylovými skupinami. DNA byla izolována z hrubých lyzátů buněk. Při přípravě hrubých lyzátů bylo testováno množství lysozymu (3 mg/ml, 10 mg/ml) v lyzačním roztoku, délka inkubace s lysozymem při laboratorní teplotě (1,5 hod, 3 hod) a s proteinázou K a SDS při 55 °C (1 hod, 3 hod, přes celou noc). Izolovaná DNA byla detekována pomocí agarósové gelové elektroforézy a spektrofotometricky. Přítomnost bakteriální DNA byla ověřena v PCR .K identifikaci byly použity specifické primery pro rod Lactobacillus, Bifidobacterium a druhy Lb. acidophilus, Lb. casei/paracasei, Lb.rRhamnosus, Lb. Plantarum, B. animalis, B. bifidum, B. infantis, B. longum. U třech probiotických preparátů (Zenflo, Linex Forte a Pangamin Bifi Plus) byla prokázána shoda PCR produktů s deklarovanými údaji. U ostatních probiotických tablet (Probian, Nutra Bona, GS Laktobacily Forte) byla shoda jen na úrovni rodů.
|
|
|
Identifikace baktérií mléčného kvašení v probiotických preparátech (tabletách) s využitím amplifikačních metod
Balogová, Petra ; Trachtová, Štěpánka (oponent) ; Španová, Alena (vedoucí práce)
Laktobacily hrají důležitou roli ve fermentačních procesech již po tisíciletí. Byly prostudovány jejich probiotické vlastnosti a dnes jsou používány při výrobě fermentovaných potravinových výrobků a doplňků stravy včetně farmakologických preparátů. V této práci byla pozornost zaměřena na zástupce rodu Lactobacillus v probiotických preparátech (tabletách). Pro identifikaci laktobacilů v sedmi probiotických preparátech byla použita metoda polymerázové řetězové reakce (PCR), založené na amplifikaci sekvence DNA. Jako DNA matrice byla do PCR směsí použita celková DNA izolovaná z tablet pomocí magnetických nosičů (P(HEMA-co¬-GMA) pokrytých karboxylovými skupinami. Rodově specifické produkty (250 bp) byly detekovány pomocí gelové elektroforézy na agaróse. Přítomnost DNA rodu Lactobacillus byla prokázána ve všech výrobcích kromě jednoho. Na etiketě tohoto výrobku byla uvedena pouze přítomnost probiotických bakterií. Pravděpodobně se jednalo o zástupce jiného rodu než Lactobacillus.
|
host ::
RSS.